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异型增生及癌变的尖锐湿疣病理及DNA含量分析
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目的：探讨尖锐湿疣从异型增生到癌变的DNA含量变化规律。
方法：应用JDICM-A图像分析系统对伴异型增生Ⅰ～Ⅲ级或伴癌变的尖锐湿疣43例进行DNA含量检测，并与25例单纯尖锐湿疣的DNA含量做比较。
结果：单纯尖锐湿疣，尖锐湿疣伴异型增生Ⅲ级，尖锐湿疣合并原位癌及尖锐湿疣癌变之间DNA含量依次递增，差异具有显著意义。其中尖锐湿疣伴异型增生Ⅲ级细胞含有大于5倍体的非整倍体细胞。
结论：尖锐湿疣伴有异型增生Ⅲ级的细胞是一种异常增殖细胞，在伴有异型增生的尖锐湿疣癌变发挥了一定作用。
尖锐湿疣是性病中发病率较高的一种，由人乳头状瘤病毒(HPV)感染所致。本单位自1990年1月～1999年5月，诊断尖锐湿疣伴鳞状上皮异型增生及尖锐湿疣癌变共43例，为探讨尖锐湿疣从异型增生到癌变的DNA含量变化规律，我们对此43例进行DNA定量检测及倍体分型，现报道如下。
1、资料与方法
1.1、临床资料：
1990年1月～1999年5月存档的经石蜡包埋病理组织学确诊的异型增生及恶变的尖锐湿疣共43例，男8例，女35例，年龄20～48岁，平均34岁。症状：病变部位瘙痒，接触性出血，白带异常等。病变部位：宫颈29例，外阴6例，阴茎4例，肛周4例。
1.2、DNA染色：
将每例组织蜡块常规切片，采用改良Feulgen法染色。方法：常规石蜡切片，脱蜡去水，10%中性缓冲福尔马林固定30 min，水洗后烘干，放入试剂A(特定噻嗪类试剂1 g溶于100 ml 0.1 mol/L HCl，再加2.5 g偏重亚硫酸钠)，置摇床上摇60 min，冲洗液洗3次，1%酸性酒精酸化，无水酒精清洁，二甲苯透明树胶封片，在普通显微镜下成深蓝色。
1.3、DNA含量测定：
JDICM-A细胞DNA定量自动化真彩色图像分析仪(上海交通大学医疗器械研制中心)，将切片置×400倍显微镜下，在每例切片上随机选取100个阳性细胞及30个小淋巴细胞，由SONY彩色摄像机将细胞图像输入JDICM-A系统，经图像冻结，光密度标定后，通过图像分割、编辑和统计，计算每个细胞核DNA积分光密度值和平均光密度值(ND)，并以该片中的小淋巴细胞DNA的平均积分光密度值作为二倍体细胞(2 C)的参照值。JDICM-A系统自动显示并打印出DNA倍体细胞所占的百分比和直方图，并计算出该例细胞核DNA指数(DI值)，二倍体的DI值定为1。
1.4、统计学处理 计量资料数据采用t检验。
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2、结果
2.1、病理检查：
肉眼：所见病变主要分布于女性外阴，宫颈；男性主要分布于龟头，冠状沟。位于肛周的4例均为男性。形态表现为多发性小米粒至黄豆大的扁平丘疹或疣状突起，呈灰红色或棕褐色，密集或散在分布，有的融合成斑块，边界尚清。镜下：根据不典型增生细胞所占之比例及异型程度划分异型增生Ⅰ～Ⅲ级。异型增生细胞占上皮层下1/3为Ⅰ级；异型增生细胞占整个上皮层之下1/2～2/3层为Ⅱ级；异型增生细胞范围超过下2/3层，细胞异型更明显，细胞边界不清，极性紊乱，核分裂增多为Ⅲ级；当异型细胞达全层时，为原位癌；如异型细胞浸润性生长时，则为癌变。在本组的43例中尖锐湿疣伴异型增生Ⅰ级13例，Ⅱ级9例，Ⅲ级12例，尖锐湿疣合并原位癌5例，尖锐湿疣伴癌变4例。
2.2、DNA含量及倍体类型 本组43例病变和作为对照组的25例单纯尖锐湿疣细胞和DNA倍体类型所占百分比DNA含量分别见表1，表2。
表1 各组细胞DNA指数检测结果( ±s)
组别 n DI值* t值 P值
对照组 25 0.92±0.05
尖锐湿疣伴异型增生Ⅰ级 13 1.02±0.025 2.31 ＞0.05
Ⅱ级 9 1.13±0.40 1.03 ＞0.05
Ⅲ级 12 2.01±0.94 2.06 ＜0.05
尖锐湿疣伴原位鳞癌 5 2.67±0.06 33.95 ＜0.001
尖锐湿疣伴鳞癌变 4 3.09±0.37 16.43 ＜0.001
注：*二倍体DI值≤1
结果显示：宫颈单纯尖锐湿疣细胞基本为2 C，占98.0%，极少数(2%)为3 C～4 C，无大于4 C的细胞；尖锐湿疣伴上皮异型增生Ⅰ级者，大多数细胞(78.4%)仍为2 C，但3 C～4 C细胞较对照组增多，占21.6%，但无大于4 C细胞。Ⅱ级者2 C细胞较对照组明显减少，3 C～4 C细胞明显增多，但仍无5 C细胞。Ⅲ级者2 C进一步减少，只占36.1%，3 C～4 C的细胞进一步增加，占46.2%，与对照组相比差异有极显著意义(P＜0.001)，同时5 C细胞占9.5%，大于5 C的细胞亦开始出现，占8.2%，总计大于4 C者占17.7%。Ⅰ～Ⅲ级异型增生细胞DNA指数均值随异型程度加重呈递增变化。尖锐湿疣伴原位鳞癌及合并鳞癌的细胞DNA指数均值高达2.67和3.09，除与Ⅲ级异型增生差异无显著外(P＞0.05)，与其它各组的差异均有极显著意义(P＜0.001)。
表2 各组病例DNA倍体类型所占百分比( ±s，%) 组别 n 2C 3C～4C 5C ＞5C 对照组 25 98.0±25.7
2.0±2.5 0 0 尖锐湿疣伴异型增生Ⅰ级
13 78.4±18.2 21.6±4.5** 0 0 Ⅱ级 9 61.2±11.3 38.8±7.1**
0 0 Ⅲ级 12 36.1±5.7* 46.2±11.5** 9.5±2.1 8.2±3.5 尖锐湿疣伴原位鳞癌
5 12.6±3.1* 51.3±15.7** 14.0±3.5 22.1±5.1 尖锐湿疣伴鳞癌变
4 3.0±0.8** 55.6±12.7** 13.4±4.2 28.0±7.8 注：与对照组比较* P＜0.01，**
P＜0.001
3、讨论
尖锐湿疣为性传播疾病，主要为HPV感染所致，而HPV感染与宫颈癌等外生殖器癌亦密切相关。
尖锐湿疣可伴有上皮细胞的异型增生，是宿主细胞DNA与病毒分子整合而发生基因突变所致，表现为细胞异常增生，通常先出现在鳞形细胞层的下1/3，由基底旁细胞开始随着病变进展可转变为原位癌。细胞核DNA含量的测定，能直接反映癌变过程中的细胞增殖和癌肿组织中的染色体数目或结构的显著异常［1］。Fischbach等［2］报道，肿瘤细胞的DNA含量与其生物学行为密切相关，DNA异倍体的出现是肿瘤生物学行为恶性，预后不良的重要指征。
肿瘤细胞DNA含量可用DI值来表示，其小于或等于1时为良性，DI值越高，则恶性程度越高，提示肿瘤细胞的增殖异常活跃。通过本组43例病变的良恶性细胞图像检测，结果显示，癌细胞DNA
DI指数均值最高，为3.09，其次是尖锐湿疣合并原位癌的细胞DNA指数均值为2.67，尖锐湿疣伴异型增生的细胞DNA指数均值随着异型增生分级的增高依次递增，差异有显著意义。
当人体组织发生癌变以及一些具有恶性潜能的癌前病变时，在其发生、发展的过程中可伴有细胞DNA含量的异常改变，在异型增生的细胞检测中，异倍体癌变率高，整倍体多为良性。在癌前病变的研究中，DNA非整倍体的出现可能是癌前病变的一种标志，增生的程度越重，出现DNA非整倍体的机率越高［3］。近年来应用图像分析仪等技术证实异型增生程度轻或在消退中的细胞85%为二倍体和多倍体，而异型增生程度高或发生癌变者，则90%为非整倍体DNA［4］。
我们的研究结果显示，单纯的尖锐湿疣，其DI值小于或等于1，细胞核DNA绝大多数为2 C，占98%，未见有超过4 C的细胞。尖锐湿疣伴上皮异型增生Ⅰ～Ⅲ级细胞显示2 C的依次递减，显示3 C～4 C的依次递增。Ⅲ级者已出现大于5 C的细胞，占17.7%，与对照组比较，差异有显著意义。可以看出，Ⅲ级异型增生细胞DNA含量及倍体类型分布与癌变细胞已十分相近。由此可见，尖锐湿疣伴有异型增生的细胞的DNA含量的递增变化与形态学改变基本一致，细胞DNA测定有助于判断异型增生细胞的病变性质，可以作为诊断癌前病变发展至癌变中的一个有价值的标志，能对癌前病变的性质及发展趋势作出估价，有助于癌变的早期诊断。
通过对细胞DNA含量的分析检测，我们认为，伴有异型增生的尖锐湿疣，特别是尖锐湿疣伴异型增生Ⅱ～Ⅲ级者，可能是外生殖器鳞癌的癌前病变，因此，异型增生细胞DNA含量的检测在伴有异型增生的尖锐湿疣的病理诊断中具有重要意义。
高宝辉 姚荣欣 张海燕 谢小志
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